У типовому синтезі ДНК, РНК і неприродних нуклеїнових кислот етап зняття захисту та зчеплення відіграє вирішальну роль.
Етап відхилення полягає у видаленні групи DMT на твердій опорі або 5 -'гідроксильній групі на попередній нуклеозиді з органічною кислотою та оголила гідроксильну групу для наступного етапу з'єднання.3% трихлороцтова кислота в дихлорметані або толуолі здебільшого використовується для виконання етапу декотекції.Концентрація трихлороцтової кислоти та час декотекції (час знежирення) домінують у чистоті кінцевих продуктів.Низька концентрація та недостатній час знежирення залишає непрореагувану групу DMT, що зменшує вихід і збільшує небажані домішки.Тривалий час зняття може призвести до депурину синтезованих послідовностей, утворюючи несподівані домішки.
Крок з’єднання чутливий до вмісту води в розчинниках та вологи в повітрі.Концентрація води в синтезі повинна бути менше 40 проміле, що краще менше 25 проміле.Щоб зберегти безводний синтез, синтез нуклеїнових кислот слід проводити в умовах низької вологості, тому ми рекомендуємо нашому замовнику використовуватиРозчинене обладнання амідитів, який може розчиняти порошкоподібний або маслянистий фосфорамідит у безводному ацетонітрилі, щоб уникнути контакту з повітрям.
Оскільки розчинення фосфорамідитів це краще в неводній ситуації, а молекулярні пастки, щоб адсорбувати мікроелементну воду в реагентах і на амідіті, потрібно підготуватиМолекулярні пастки.Ми рекомендуємо 2 г, дотримуйтесь пляшок 50-250 мл реагенту, 5 г для пляшок реагенту 250-500 мл, 10 г для пляшок реагенту 500-1000 мл та 20 г для пляшок реагенту 1000-2000 мл.
Розчин фосфорамідитів слід проводити в інертній атмосфері, а заміну реагентів-активаторів і ацетонітрилу слід вчасно завершити.Реагенти для блокування та окислення слід використати якнайшвидше, відкриті реагенти дають менший термін зберігання та меншу активність під час синтезу.
Час публікації: 09 серпня 2022 р