Принципи синтезу нуклеїнової кислоти

Синтез нуклеїнової кислоти здійснюється твердофазним сіаловим амідним тригліцеридним методом, за допомогою якого 3'-кінець ДНК іммобілізують на твердофазному субстраті, а нуклеотиди додають у напрямку 3'-5', доки не буде синтезовано потрібний фрагмент ДНК .Це відрізняється від синтезу ДНК застосуванням ДНК-полімерази.

3 'кінець першої основи іммобілізується на CPG під час синтезу, 5'-OH наступної основи захищена DI-P-Tolyl Trityl DMT, аміногрупа на основі захищена бензойною кислотою та 3' -OH потім активується з амінофосфатною сполукою.1 основа 5 5'-OH 1 основи та 3'-OH наступної основи утворюють фосфитний тригліцерид, який потім окислюється йодом до фосфатного тригліцериду, захисник на другій основі 5'-OH видаляється на Додавання циклів ДМ-дихлороцтової кислоти через додавання наступної основи, а після синтезу захисник на 5'-OH видаляється слабкою кислотою, фрагмент відключається з твердої смоли з концентрованим гідроксидом амонію, захисник видаляється з основи При концентрованому гідроксиді амонію при нагріванні гідроксид амонію видаляють, фрагмент висушують вакуум, а нуклеїнова кислота очищають рідинною хроматографією або сторінкою.

Етапи синтезу оліго

Розблокування

The5 Кінцева група DMT Захист видаляється шляхом додавання розчину TCA.

Активація

Змішування активатора з олігонуклеотидним мономером для утворення активного олігонуклеотидного мономерного проміжного продукту.

Зчеплення

5-кінцева гідроксильна група реагує з активним олігонуклеотидним проміжним продуктом у реакції антигенеративної конденсації, утворюючи нестабільну фосфитну тригліцеридну зв’язок.

Укупорка 

Додавання агента, що обмежує ацетилювання, реакцію з надлишковими гідроксильними групами, які не беруть участь у реакції конденсації.

Окислення 

Додавання йодного розчину, що містить воду, реагує з нестабільними фосфитними зв’язками шляхом окислення з утворенням стабільних тригліцеридних зв’язків фосфорної кислоти.

Ціаноетил розщеплення

Продукт нуклеїнової кислоти після синтезу з додаванням розчину DEA для видалення ціаноетильної групи з фосфатного тригліцеридного зв’язку.

Розщеплення та зняття захисту

Фрагменти нуклеїнової кислоти розщеплюють з твердої фазової носії шляхом додавання концентрованого розчину гідроксиду амонію і потім нагріваються для видалення захисних груп з водневих зв’язків основи.